Sissejuhatus PCR-i ja RT-qPCR-i

PCR (DNA ahela polümerisatsioon) ja RT-qPCR (pöördtranskriptaas ja reaalajas PCR) on lühendid, mis varjavad endas erakordseid võimalusi molekulaarbioloogia valdkonnas. Need arenenud tehnoloogiad ei vääri mitte ainult teadlaste tähelepanu, vaid neil on ka tohutu mõju revolutsioonile geeniuuringute valdkonnas.

Nende tehnoloogiate mõistmine on ülioluline, et hinnata nende potentsiaali ja rakendust erinevates teadusvaldkondades. PCR ja RT-qPCR toimemehhanismide mõistmine võimaldab teha täpsemaid ja arenenumaid geeniuuringuid, avades uusi vaatenurki meditsiini, molekulaarbioloogia ja biomeditsiiniteaduste vallas. Need on vahendid, mis mitte ainult ei hõlbusta teadlaste tööd, vaid aitavad kaasa ka elusorganismide geenifunktsioonide ja regulatsioonimehhanismide saladuste avastamisele.

PCR – mis see tegelikult on?

Lühend tähistab DNA ahelate polümerisatsiooni ja see meetod võimaldab spetsiifiliste DNA järjestuste mitut koopiat. See on nagu revolutsioon selles, kuidas me uurime ja mõistame elu geneetilist koodi. Polümeraasi ahelreaktsioon (PCR) on suhteliselt lihtne ja laialdaselt kasutatav meetod molekulaarbioloogias DNA ja RNA järjestuste amplifitseerimiseks ja tuvastamiseks. Võrreldes traditsiooniliste DNA kloonimise ja amplifitseerimise meetoditega, milleks kulub sageli mitu päeva, võtab PCR aega vaid mõne tunni. See on väga tundlik ja nõuab teatud järjestuste tuvastamiseks ja võimendamiseks minimaalset maatriksit.

Kuidas PCR töötab?

PCR protsess on tõeline geenide tants. Spetsiaalne DNA polümeraas on peamine täht, mis lõhustab ja kopeerib DNA ahelaid kuumutamis- ja jahutamistsüklite ajal. See on nagu harmooniline protsess, milles igal sammul on oma koht, võimaldades meil geneetilist materjali kiiresti ja täpselt kopeerida. See protsess võimaldab tuvastada, analüüsida ja toota suurel hulgal konkreetse DNA fragmendi koopiaid. PCR toimib järgmiselt.

  1. Denatureerimine (lahustumine): PCR reaktsioon algab proovi kuumutamisega temperatuurini ligikaudu 94-98 kraadi Celsiuse järgi. Selles protsessis kaheahelaline DNA lahustub, st kaks ahelat eralduvad, mida nimetatakse denaturatsiooniks. See veereva ahela eraldamine on võtmeetapp, kuna see võimaldab polümeraasil juurdepääsu ühele DNA ahelale.
  2. Hübridiseerimine (kombineerimine): Seejärel alandatakse reaktsiooni temperatuuri, tavaliselt umbes 50-65 kraadini Celsiuse järgi. Sellel temperatuuril algab hübridisatsiooniprotsess, kus spetsiaalselt loodud praimerid (lühikesed nukleotiidjärjestused) ühinevad komplementaarsete järjestustega ühel DNA ahelal. Need praimerid on DNA polümeraasi lähtepunktid.
  3. Pikendamine (pikenemine): Temperatuuri tõstetakse uuesti, tavaliselt umbes 72 kraadini Celsiuse järgi. Selles etapis hakkab aktiveeritud DNA polümeraas sünteesima uut DNA ahelat, kasutades ühte DNA ahelatest mallina. Saadud produkt on samuti komplementaarne algse DNA järjestusega.

Ülaltoodud kolm etappi (denatureerimine, hübridisatsioon, elongatsioon) moodustavad ühe amplifikatsioonitsükli. Seejärel korratakse seda protsessi mitu korda, mis viib sihtmärk-DNA järjestuse koopiate arvu eksponentsiaalse suurenemiseni. Seejärel saab PCR tulemusi analüüsida, kasutades näiteks elektroforeesi, DNA sekveneerimist või muid meetodeid, olenevalt uuringu eesmärgist. PCR-i kasutatakse diagnostikas, geneetilises testimises, DNA tuvastamises ja paljudes teistes molekulaarbioloogia valdkondades.

RT-qPCR – mida see keeruline lühend tähendab?

See on täiustatud molekulaarne tehnika, mis ühendab pöördtranskriptaasi (RT) ja reaalajas PCR-i, võimaldades geeniekspressiooni kvantitatiivset analüüsi.

Siin on selle otsetee jaotus:

  1. RT (pöördtranskriptsioon): See tähistab pöördtranskriptaasi. See on ensüüm, mis muudab RNA (ribonukleiinhappe) komplementaarseks DNA-ks (desoksüribonukleiinhappeks), luues nn. cDNA (DNA komplementaarne koopia).
  2. qPCR (kvantitatiivne polümeraasi ahelreaktsioon): See tähendab kvantitatiivset polümeraasi ahelreaktsiooni. See on reaalajas DNA amplifikatsiooni tehnika, mis tähendab, et protsessi jälgitakse jooksvalt, võimaldades määrata algse geneetilise materjali täpse koguse.

RT-qPCR-i kasutatakse laialdaselt molekulaarbioloogias mRNA (ribonukleiinhappe) koguse mõõtmiseks bioloogilistes proovides. See võimaldab teadlastel mõista, millised geenid on antud olukorras aktiveeritud või deaktiveeritud, mis on oluline geenifunktsiooni, geneetiliste haiguste, molekulaardiagnostika ja muude uurimisvaldkondade uuringutes.

Pöördtranskriptaas RT-qPCR-is

Reaalajas pöördtranskriptsiooni-kvantitatiivne polümeraasi ahelreaktsioon (RT-qPCR) on meetod, mida kasutatakse kvantitatiivse geeniekspressiooni analüüsimiseks. See protsess hõlmab RNA konverteerimist selle komplementaarseks DNA-ks ja seejärel selle nukleiinhappe amplifitseerimist polümeraasi ahelreaktsiooni (PCR) abil.

Pöördtranskriptaas on ensüüm, mis võimaldab RNA matriitsil põhineva üheahelalise DNA (cDNA) sünteesi. RT-qPCR-is allutatakse seejärel cDNA-le reaalajas PCR, kus amplifitseeritud DNA kogust jälgitakse iga järgneva reaktsioonivooru ajal.

Seda meetodit kasutatakse sageli mRNA koguse mõõtmiseks bioloogilistes proovides, võimaldades teadlastel mõista, millised geenid teatud seisundis aktiveeritakse või kustuvad. RT-qPCR-i kasutatakse ka molekulaardiagnostikas, geneetiliste haiguste uuringutes ja muudes molekulaarbioloogia valdkondades.

Reaalajas PCR – kiirus ja täpsus

Reaalajas PCR-i kiirus tuleneb võimalusest jälgida amplifitseeritud DNA kogust reaktsiooni enda ajal. Tänu spetsiaalsetele reaktsioonis olevatele fluorokroomidele või sondidele on võimalik amplifikatsiooni kulgu reaalajas jälgida. See võimaldab saada tulemusi reaalajas või väga kiiresti pärast reaktsiooni lõppemist.

Selle tehnika täpsus tuleneb võimest mõõta DNA kogust reaktsiooni erinevates etappides, mis võimaldab täpselt määrata geneetilise materjali esialgse koguse. Lisaks võimaldab reaalajas PCR tuvastada isegi väikeseid DNA koguseid, mis on kvantitatiivse analüüsi puhul oluline.

Need omadused muudavad reaalajas PCR-i laialdaselt kasutatavaks meetodiks geeniuuringutes, molekulaardiagnostikas, geeniekspressiooniuuringutes ja paljudes teistes molekulaarbioloogia valdkondades, kus nii kiirus kui täpsus on üliolulised.

Peamised erinevused PCR ja RT-qPCR vahel

Nüüd, kui teame põhitõdesid, tasub sukelduda PCR-i ja RT-qPCR-i peamistesse erinevustesse. See, mis neid eristab, on geeniuuringute edenemise jaoks väga oluline.

  • Geneetilise materjali olemus

PCR on nagu geneetiline arhiiv, mis toimib olemasoleval DNA-l. RT-qPCR on nagu kaasaegne detektiiv, mis analüüsib nii DNA-d kui RNA-d, mis annab meile geneetilisest pärandist terviklikuma pildi.

  • Tundlikkus ja täpsus

RT-qPCR pakub geneetilise materjali kvantitatiivses analüüsis suuremat tundlikkust ja täpsust. See on nagu täpne mikroskoop, mis võimaldab meil näha ka kõige väiksemaid muutusi geneetilises koodis.

  • Rakendused diagnostikas

PCR-i kasutatakse sageli geneetiliste haiguste diagnoosimisel, kuid RT-qPCR on nagu uus diagnostika ajastu. Geeniekspressiooni analüüs võimaldab meil mõista mitte ainult haiguse esinemist, vaid ka selle mehhanisme geneetilisel tasandil.

summeerimine

PCR (polümeraasi ahelreaktsioon) ja RT-qPCR (pöördtranskriptsiooni kvantitatiivne polümeraasi ahelreaktsioon) on kaks täiustatud molekulaarset meetodit, mis, kuigi neil on mõningaid sarnasusi, erinevad nende rakendustes märkimisväärselt. PCR on DNA amplifikatsioonitehnika, mis võimaldab teha mitut koopiat konkreetsetest geneetilise materjali fragmentidest. Seda kasutatakse laialdaselt geeniuuringutes, geneetiliste haiguste diagnoosimises ja muudes molekulaarbioloogia valdkondades.

RT-qPCR on omakorda kahe võtmeprotsessi kombinatsioon: pöördtranskriptsioon (RT), mis muudab RNA komplementaarseks DNA fragmendiks, ja kvantitatiivne polümeraasi ahelreaktsioon (qPCR), mis võimaldab kopeeritud DNA kvantitatiivset analüüsi reaalajas. See on äärmiselt kasulik vahend geeniekspressiooni, eriti mRNA analüüsimiseks, mis võimaldab uurida muutusi rakkude bioloogilises vastuses erinevatele teguritele.

PCR-i ja RT-qPCR-i erinevused määravad nende rakendused. PCR keskendub DNA amplifikatsioonile, samas kui RT-qPCR-i kasutatakse peamiselt RNA koguste täpseks kvantitatiivseks analüüsiks. Seetõttu on geeniekspressiooniuuringutes asendamatu RT-qPCR, mis võimaldab hoolikalt jälgida erinevate bioloogiliste protsessidega seotud geeniaktiivsuse taseme muutusi.

Nende tehnikate mõistmine on molekulaarbioloogia valdkonna edasiminekuks ülioluline, kuna need võimaldavad geneetilist testimist erinevatel tasanditel, mis lõppkokkuvõttes toob kaasa uusi avastusi ja revolutsioone geneetikas ja rakubioloogias.

Plastid PCR ja RT-qPCR jaoks

Külastage Genoplasti kauplust, kust leiate kvaliteetseid laboriplaste, mis sobivad ideaalselt PCR ja RT-qPCR reaktsioonide läbiviimiseks. Meie tooteid ei iseloomusta mitte ainult vastupidavus ja täpsus, vaid need vastavad ka kõrgeimatele kvaliteedistandarditele. Need muudavad teie katsed veelgi tõhusamaks ja usaldusväärsemaks. Meie valikus on mitmesuguseid tooteid, nagu katseklaasid, PCR ja RT-qPCR plaadid, mis on laboris hädavajalikud. Valige professionaalsus ja kasutage Genoplasti pakkumist, et saavutada oma uurimistöös suurepäraseid tulemusi. 

-60%
Algne hind oli: 203,87 €.Hetkel hind: 81,55€.
Sellel tootel on mitu varianti. Valikud saab valida toote lehel
-60%
Algne hind oli: 13,61 €.Hetkel hind: 5,44€.
Sellel tootel on mitu varianti. Valikud saab valida toote lehel
-60%
Algne hind oli: 54,16 €.Hetkel hind: 21,66€.
Sellel tootel on mitu varianti. Valikud saab valida toote lehel
-72%
-60%
Algne hind oli: 163,04 €.Hetkel hind: 65,22€.
Sellel tootel on mitu varianti. Valikud saab valida toote lehel
-60%
Algne hind oli: 100,44 €.Hetkel hind: 40,18€.
Sellel tootel on mitu varianti. Valikud saab valida toote lehel
-60%
43,44 - 65,22
Sellel tootel on mitu varianti. Valikud saab valida toote lehel
-30%

PLASTID PCR-ks

Plaadid Elisale

Algne hind oli: 190,26 €.Hetkel hind: 133,17€.
Sellel tootel on mitu varianti. Valikud saab valida toote lehel

KKK

PCR amplifitseerib DNA-d, samas kui RT-qPCR analüüsib nii DNA-d kui ka RNA-d.

RT-qPCR-i kasutatakse sageli geeniekspressiooni analüüsimiseks ja geneetiliste haiguste diagnoosimiseks.

RT-qPCR pakub suuremat täpsust tänu geneetilise materjali reaalajas kvantitatiivsele analüüsile.

PCR-i kasutatakse sageli geneetiliste haiguste diagnoosimisel ja spetsiifiliste DNA järjestuste tuvastamisega seotud uuringutes.

Kas olete huvitatud geneetikast? Vaadake meie PCR ja RT-qPCR testimistooteid

Geneetikatooted

Liituge meie kogukonnaga Facebook